El juego se sitúa unos meses después de los eventos de la película.
Peter Parker y Gwen Stacy se cuelan en las zonas restringidas de Oscorp después del horario, donde Gwen revela sus sospechas de que puedan estar continuando los experimentos de cruzar especies de Curt Connors. En el proceso, son capturados por Alistair Smythe, el nuevo director, quien explica que algunos científicos estaban de hecho continuando en secreto los experimentos de cruzar especies de Connors al inyectarle a animales con ADN humano; las especies cruzadas llevan un poderoso virus y actualmente están siendo enviados a un bio-laboratorio para su eliminación. En ese momento, todas las especies cruzadas reaccionan ante la presencia de Peter y escapan, infectando a todos los científicos, incluyendo Smythe y Gwen, en el proceso. Alistair desata sus robots de seguridad, que están programados para defenderlos de las especies cruzadas. Sin embargo, terminan atacando a Peter, ya que técnicamente es una mezcla de especies también. Peter rápidamente se pone su traje de Spider-Man y lleva a los infectados a la cuarentena, luchando contra los robots en el proceso, pero es incapaz de detener a las especies cruzadas que escapan a la ciudad.
Spider-Man trata de luchar contra las especies cruzadas en la ciudad, pero todas éstas se escapan, y un robot gigante de seguridad le ataca también, causando un gran daño a la ciudad. Spider-Man va al Hospital Psiquiátrico de Beloit, donde el Dr. Connors ha estado encarcelado desde la masacre del Lagarto, y le informa del incidente. Connors acepta escapar de la institución y ayudar a Spider-Man a desarrollar una cura para la epidemia, pero solo si es devuelto al asilo cuando la crisis se resuelva. Después de sacar a Connors, Spider-Man vuelve al apartamento del amigo de su tía May Stan (para la cual estuvo guardando la casa) con Connors, donde instalan de inmediato un laboratorio para iniciar el desarrollo del antídoto, que pronto se convierte en una carrera contra el tiempo cuando se descubre que Smythe está desarrollando su propia "cura", que incluye nanobots destruyendo el huésped de adentro hacia afuera. En el camino, Spider-Man decodifica las transmisiones de la policía y Oscorp
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